Infección oculta por el virus de la hepatitis B en pacientes hemodializados cubanos / Occult hepatitis B virus infection in hemodialysis patients

Introducción: la infección oculta por el virus de la hepatitis B se caracteriza por la presencia en suero o plasma del genoma viral y anticuerpos contra la proteína de la cápsida (anti-HBc) en ausencia del marcador de infección.Objetivos: detectar la IOB en los pacientes hemodializados e identificar la posible relación de la IOB con la infección por el virus de la hepatitis C y variables sociodemográficas y epidemiológicas.Métodos: se estudiaron 709 muestras de pacientes provenientes de 18 unidades de hemodiálisis de Cuba. Se determinaron marcadores de infección, exposición e inmunidad al virus de la hepatitis B. Las muestras con HBsAg negativo, anti-HBc positivo y niveles de anti-HBs < 50 UI/L se les analizó la detección de ADN del virus de la hepatitis B y marcadores de lvirus de la hepatitis C.Resultados: las prevalencias de la infección y la exposición al virus de la hepatitis B fueron de 6,9 por ciento y 28,6 por ciento, respectivamente. El 4,3 por ciento de las muestras tuvieron criterio de infección oculta por el virus de la hepatitis B ; esta se detectó en el 58,1 por ciento (18/31) de los casos, con cargas virales menores de 105 UI/mL. La prevalencia global de infección oculta por el virus de la hepatitis B fue de 2,5 por ciento (18/709). No se encontró asociación significativa entre las variables analizadas.Conclusiones: la infección oculta por el virus de la hepatitis B fue frecuente en pacientes hemodializados con bajos niveles de anti-HBs, principalmente en aquellos con concentraciones no protectoras. Este estudio ratifica la necesidad de mantener la estrategia de prevención contra las hepatitis virales de transmisión parenteral en las unidades de diálisis(AU)

Introduction: occult hepatitis B virus infection is characterized by the presence of the viral genome and antibodies to the capside protein in serum or plasma (anti-HBc) that test negative for the infection marker.Objectives: to detect the occult hepatitis B virus in hemodialysis patients and to identify the possible relationship between occult hepatitis B infection and hepatitis C virus infection and the epidemiological and demographic variables.Methods: seventy thousand and nine serum samples from patients treated in 18 hemodialysis units were included. Serological markers for HBV infection, exposure and immunity were tested. Samples with negative HBsAg , positive anti-HBc and anti-HBs titers <50 IU/L were tested for detection of HBV-DNA and HCV markers.Results: the prevalence of HBV infection and exposure were 6.9 percent and 28.6 percent respectively. In the group, 4.3 percent of samples met occult hepatitis B infection criteria, the HBV-DNA was detected in 58.1 percent (18/31) of the samples, with viral loads below 105 IU/mL. Overall occult hepatitis B infection prevalence was 2.5 percent (18/709). There was no significant association among the analyzed variables.Conclusions: occult hepatitis B infection was frequent in hemodialysis patients with low levels of anti-HBs mainly in those with non protected titers. This study supports the need of keeping the prevention strategies against parenterally transmitted viral hepatitis in dialysis units(AU)

Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B / Real-time polymerase chain reaction assay for Hepatitis B virus DNA quantification

Introducción: los niveles de ADN viral en muestras de suero son un marcador útil para monitorear la progresión de la enfermedad y la respuesta al tratamiento en pacientes con hepatitis B crónica; de ahí que se comercialicen estuches diagnósticos para esta función, con la desventaja de ser costosos. Objetivos: desarrollar y evaluar el desempeño analítico de un sistema de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B. Métodos: se utilizaron cebadores que amplifican un fragmento del gen C y sonda de hidrólisis en el equipo LightCycler 1.5. Se construyó una curva estándar y se evaluó su eficiencia. Se utilizaron 272 muestras de suero para ensayos de especificidad analítica y clínica, especificidad y exactitud genotípica, coeficientes de variación intraensayo e interensayo, comparación con un estuche comercial y con la reacción en cadena de la polimerasa cualitativa para el virus de la hepatitis B. Resultados: la curva estándar mostró excelente correlación lineal (r= -1) y valores muy bajos de error a lo largo de varias magnitudes de concentración de ADN diana. La especificidad analítica y clínica fue de 100 %, en tanto que al evaluar la especificidad y exactitud genotípica, se obtuvo que las diferencias entre los Log10 del valor obtenido y el de referencia eran inferiores a 0,5 Log10. El límite de detección por análisis de Probit se estimó en 16,41 UI/µL con un rango dinámico de cuantificación de hasta 10(8) UI/mL. El sistema mostró bajos coeficientes de variación intraensayo (0,16 a 1,45 %) e interensayo (0,9 a 2,62 %). La comparación con el estuche comercial artus HBV LC PCR kit mostró una correlación de r= 0,964 y r²= 0,929; con la reacción en cadena de la polimerasa cualitativa se confirmó la mayor sensibilidad y ventajas de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. Conclusiones: el ensayo cumple con los requisitos para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B, que demuestra ser específico, sensible y reproducible. Su aplicación permitirá un mejor diagnóstico y seguimiento de los pacientes con hepatitis B crónica en Cuba.

Introduction: viral DNA levels in serum samples are a useful marker to monitor the disease progression and the treatment response in patients with chronic hepatitis B. Commercial kits for this purpose are available, but they are considerably expensive. Objectives: to evaluate the analytical performance of a real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) assay for Hepatitis B virus DNA quantification. Methods: specific primers to the gene C and TaqMan chemistry in a LightCycler 1.5 equipment was used. A standard curve was made and evaluated. Two hundred and seventy-two serum samples were used to assess the clinical and analytical specificity, the genotypic accuracy and specificity, the intra-assay and interassay coefficients of variation and the comparison with a commercial assay and with the qualitative PCR. Results: the standard curve showed a strong linear correlation (r= -1) and low error values in the tested target DNA concentration. Analytical and clinical specificities were 100 %. Genotype accuracy and specificity showed that the differences between the results obtained by RT-PCR assay and those of the reference assay were less than 0.5 Log10. The 95% HBV DNA detection end-point assessed by Probit analysis was 16.41 IU/µL with a dynamic range of quantification of 10(8) IU/mL. Intra-assay and interassay coefficients of variation ranged from 0.16 to 1.45 % and 0.9 to 2.62 % respectively. The RT-PCR assay correlated well with those from a commercial assay (r= 0.964 and r²= 0.929) and with the HBV qualitative PCR, thus confirming its better sensitivity and advantages. Conclusions: the RT-PCR assay is well suited to monitoring HBV DNA levels showing to be sensitive, specific and reproducible. Its application in the clinical practice ensures a better diagnosis and management of patients with chronic hepatitis B in Cuba.

Aislamiento y propagación del virus de la hepatitis E en diferentes líneas celulares / Isolation and propagation of hepatitis E virus in several cell lines

Antecedentes: el virus de la hepatitis E es el agente causal de la hepatitis E. Las propiedades biológicas y moleculares de las cepas asiáticas del VHE ya han sido exploradas en cultivos celulares. Objetivos: aislar y propagar una cepa cubana del virus de la hepatitis E en diferentes líneas celulares. Métodos: la monocapa de las células A549 fue inoculada con una suspensión de heces obtenida de un paciente con diagnóstico serológico y molecular de hepatitis E. Estas células fueron observadas hasta el décimo pase. Mientras que, las líneas celulares MRC5, LLCMK2, HEP-2, FRhK4 y HeLa fueron utilizadas para propagar el virus de la hepatitis E, a partir del sobrenadante obtenido del tercer pase en A549. Estas células fueron seguidas hasta el tercer pase. El ARN y los antígenos de la cepa ECV/2349-03 fueron identificados por TR-RCP e inmunofluorescencia indirecta. Resultados: en las células A549 el ECP apareció desde el primer pase, a los 3 d de posinoculación. El genoma y los antígenos del virus fueron identificados en todos los pases seriados. En el resto de las líneas celulares estudiadas no se observó el ECP. En estas células el material genético del virus de la hepatitis E se detectó desde el primer pase y los antígenos a partir del segundo pase, excepto en las HeLa. Conclusiones: estos resultados confirman que las células A549 pueden ser utilizadas para aislar y propagar el virus de la hepatitis E, mientras que las células MRC5, LLCMK2, HEP-2 y FRhK4 son capaces de mantener el crecimiento viral.

Background: hepatitis E virus (HEV) is the causative agent of hepatitis E. Biological and molecular properties of Asian HEV strains have been explored in cells cultures. Objetives: the aim of this investigation was to isolate and propagate a Cuban HEV isolate in different cell lines. Methods: A549 cells monolayer was infected with faeces suspension from patient with sporadic hepatitis E and followed up until tenth passage. Lately, the supernatant harvested from third passage in A549 cells was inoculated in MRC5, HEP-2, LLCMK2, HeLa y FRhK4 for propagation study. These cells were observed up to third passage. RNA and viral antigen of ECV/2349-03 HEV strain were identified by RT-PCR and indirect immunofluorescence. Results: CPE appeared since first passage, at third day of post-inoculation in A549 cells. HEV antigens and genome were detected in all serial passages. CPE was not observed in the rest of cellular cultures. In the cells used for propagation the viral genome was observed from first passage, while the antigens were detected since second passage, except HeLa. Conclusions: these results confirm that A549 can be used to isolate and propagate HEV. Meanwhile, the MRC5, HEP-2, LLCMK2 and FRhK4 were able to support viral growing.

Hepatitis C en pacientes VIH positivos / Hepatitis C virus in HIV-positive patients

Introducción: la infección por el virus de la hepatitis C (VHC) es un problema de salud mundial. El VHC y el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) comparten similares vías de transmisión y algunas características epidemiológicas; en coinfectados VHC/VIH, el comportamiento de la hepatitis y la evolución de la infección por VIH es acelerado. OBJETIVOS: contribuir al conocimiento de la infección por VHC en pacientes VIH (+), determinar la prevalencia de anticuerpos al VHC (anti-VHC) en un grupo de pacientes VIH (+), relacionar la detección del ARN-VHC con las fases VIH o sida, de estos pacientes y con el sexo. Métodos: se estudiaron 1 065 muestras de sueros de pacientes VIH (+) recibidas en el Laboratorio Nacional de Referencia de Hepatitis viral, Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí, durante 2007. Las técnicas utilizadas fueron la determinación de anticuerpos al VHC (anti-VHC) por UMELISA HCV y determinación de ARN del VHC por UMELOSA HCV (Centro de Inmunoensayo). Resultados: 14,27 por ciento de los pacientes VIH fueron positivos a anti-VHC; a un grupo de estos con cifras de transaminasas por encima de los valores normales, se les realizó la técnica de UMELOSA y se detectó un elevado porcentaje de positividad (77,7 por ciento) al ARN a VHC, como se reporta en la literatura universal. De los pacientes que estaban replicando VHC, 80 por ciento estaba en fase SIDA; además, predominaron los pacientes del sexo masculino. Conclusiones: se confima la importancia de la infección por VHC en los pacientes VIH (+).

Background: the infection produced by the hepatitis C virus (HCV) is a world health problem. The HCV and the human immunodeficiency virus (HIV) share communicable ways and some epidemiological characteristics; in coinfected HCV/HIV patients, the behavior and the evolution of the infection in HIV patients is accelerated. Objectives: to contribute to the expansion of knowledge on HCV infection in HIV-positive patients; to determine the anti-HCV prevalence in a group of HIV-positive patients; to associate the detection of the RNA-HCV with the HIV or AIDS stages in these patients and with the sex. Methods: one thousand and sixty five serum samples from HIV-positive patients were examined in the National Reference Laboratory of Viral Hepatitis of Pedro Kourí Institute of Tropical Medicine during 2007. The used techniques were: antibodies to HCV determination using the UMELISA HCV and determination HCV RNA by UMELOSA HCV (Inmunoassay Center). Results: in HIV-positive patients, 14.27 percent was positive to anti-HVC; besides, a group of them with aminotransferase count above the normal values was applied UMELOSA, thus detecting a high percent (77.7 percent) of positivity to HCV RNA, this results is in line with those reported in international literature. Almost 80 percent of the patients that presented with HCV replication were already in the AIDS phase. The male sex was predominant. Conclusions: these results confirmed the weight of the HCV infection in HIV-positive patients.

Vigilancia de las hepatitis virales: resultados de laboratorio: Cuba, 1992-2004 / Surveillance of viral hepatitis: laboratory results: Cuba, 1992-2004

Se presentaron los resultados de la vigilancia de la hepatitis viral en el período 1992-2004. La infección por el virus de la hepatitis A es la más frecuente asociación que origina cuadros de hepatitis viral aguda entre los pacientes menores de 24 años y antígeno de superficie de la hepatitis B (AgsHB) positivo, seguida por el virus de la hepatitis B. El virus de la hepatitis A solo o con el virus de la hepatitis B, aporta 48,88 por ciento de los casos. Solamente 48,71 por ciento en que se sospecha una hepatitis B aguda, se confirman desde el punto de vista virológico. Estos resultados permiten profundizar en el conocimiento del comportamiento de los virus de las hepatitis en las condiciones cubanas, lo que hará posible formular mejores estrategias de control o eliminación de la hepatitis viral, o ambos

The results of the surveillance of the viral hepatitis in the period 1992-2004 are presented. The HAV infection is the most frequent association that originates pictures of acute viral hepatitis among the patients under 24 years old with positive HBsAg, followed by the hepatitis B virus. The hepatitis A virus alone or co-infected with the hepatitis B virus accounts for 48.88% of the cases. Only 48.71% of the cases among whom acute hepatitis B is suspected, are confirmed from the virological point of view. These results allow to go deep into the knowledge of the behaviour of hepatitis viruses under the Cuban conditions, making possible to establish better strategies for the control or elimination of viral hepatitis, or both.

Detección de marcadores de hepatitis B y hepatitis C en pacientes VIH positivos, 2000-2004 / Detection of hepaptitis B and hepatitis C markers in HIV positive patients, 2000-2004

Se estableció como objetivo conocer la coinfección entre los virus de la hepatitis B (VHB), hepatitis C (VHC) y virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en el período estudiado. Existe una asociación marcada entre estos virus, porque la vías de transmisión y los grupos de riesgo son muy similares. Durante los años 2000-2004 se recibieron en el Laboratorio Nacional de Referencia de Hepatitis viral (IPK), 2 994 muestras de sueros de pacientes VIH (+) para investigar antígeno de superficie al VHB (HBsAg) y anticuerpos anti-VHC, ambos por la técnica de UMELISA (Centro de Inmunoensayo, CIE, La Habana, Cuba). Se realizó análisis estadístico de los resultados por el programa Epi Info (Versión 6,04). Se encontró en 10,3 por ciento positividad al HBsAg, 10,4 por ciento tenía anticuerpos anti-VHC y hubo coinfección VHB, VHC y VIH en 1,7 por ciento. Se confirmó lo planteado en la literatura sobre las coinfecciones VHB, VHC y VIH